分子量排阻层析（SEC）又称凝胶过滤层析，它根据分子量大小来分离分子。凝胶基质由大小孔隙的球形 小珠组成，不同分子量的分子从孔中排阻通过，发生分离。小分子进入孔内，会延滞它们通过层析柱，而大分子避 开孔，洗脱入层析柱外水体积。因此，样品根据分子量大小进行分离，并依照分子量递减顺序洗脱。

依据层析目的和所需的分辨率来选择操作条件和介质。分子量排阻层析中一种常规的方法为基团分离，包括：

脱盐— 目标分子洗脱出来，而小分子保留在凝胶孔内。为了获得理想的分离，基质的分子量排阻限度应比目 标分子小。

分分离— 一定分子量范围的分子在凝胶基质内分离。使用这种方法时，目标分子应当在凝胶的分分离范 围以内。

分子量排阻层析常规应用包括蛋白分分离及分子量确定、核酸分离、质粒纯化和多糖分分离。

层析分辨率取决于颗粒大小、孔径大小、流速、层析柱尺寸和样品体积。通常，低流速（2–10 cm/hr）、细长 柱、小颗粒凝胶、小样品体积（总床体积的1–5%）、2 倍的分子量差异以及相同的溶液粘度，可以获得较高分辨率。 如果用于脱盐，样品体积则可达到总床体积的30–40%，并可使用短粗柱。

关于抗体纯化应用指南，请索取资料# 1802。蛋白应用指南请索取资料# 1801。

瓶装分子量排阻层析介质

Bio–Gel P 聚丙烯酰胺微球体由丙烯酰胺和N,N'– 甲叉双丙烯 酰胺共聚而成，用于高分辨率的凝胶过滤。Bio–Gel P 凝胶具有以 下特点：

• 可分离不同大小的分子，分子量范围从100至100,000
• 本质上虽是非离子，但极度亲水
• 为敏感化合物提供有效而温和的凝胶过滤
• 特殊的合成组份，不象右旋糖苷和琼脂糖易滋生微生物或过滤碳水化合物
• 在室温、pH 2–10条件下操作，可高压灭菌（pH 5.5–6.5）。流速和分辨率随着温度的递增（4–80°C）而增加

Bio–Gel P凝胶可与弱有机酸、8M尿素、离液剂、去垢剂和易混有机溶剂兼容。酒精（较高20% v/v）可以提高 核苷酸、多肽和丹宁酸的溶解度，而不改变凝胶的排阻特性。同样可以使用甲酰胺溶剂，Bio–Gel P凝胶可在该溶剂 内完全溶胀。

Bio–Gel P–6DG凝胶的较大分子量排阻为6,000，是专为脱盐和缓冲液置换而设计。它可迅速获得结果，且回收 率高、样品稀释度小。凝胶的疏水性确保与样品分子间几乎不发生交互作用。

更多信息，请索取资料# 2068。

Bio–Beads S–X 介质是中性、多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球体，用于亲脂性多聚物和有机洗脱溶质的分子量 排阻层析。分子量400–14,000 的排阻范围，可用于分离分子量小的有机多聚物和其它疏水物质，如杀虫剂、灭鼠 剂、多环芳香化合物和不饱和脂类。使用不同的洗脱剂会影响排阻。用Bio–Beads S–X 介质分离需要可流动的 洗脱剂，因此，该介质必须在层析柱内使用。洗脱溶剂的芳香性越强，排阻越高。介质可与苯、甲苯、二甲苯、 四氯化碳、二甲基甲酰胺、酮、芳香族类、二氯甲烷、o–二氯(代)苯、全氯乙烯、四氢呋喃和三氯(代) 苯等试剂兼容。

与交联度相关的推荐流速：

• 1% 交联度树脂仅用于重力流层析
• 3% 交联度树脂可承受背压20 bar 或300 psi，5 ml/in 的流速
• 8% 和12% 交联度树脂可承受多达33 bar 或500 psi 的背压

预装分子量排阻层析柱

为方便用户，我们提供填装Bio–Gel P–6 介质的预装Econo–Pac 滤柱（1 ml 和5 ml）。由于Econo–Pac 滤柱无 需制备凝胶或装柱，简化了层析过程。滤柱可与BioLogic 系统、蠕动泵或任何层析系统配合使用，并可与注射器 连接进行简单洗脱。

同时提供填装有其它介质的Econo–Pac 滤柱；离子交换滤柱，羟基磷灰石滤柱，亲和滤柱， 疏水作用滤柱。

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名称	载体	样品体积
脱盐，缓冲液置换
P–6	Bio–Gel P–6	100 μl–3.0 ml

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Bio–Sil 和Bio–Silect 层析柱是以硅材料为基质，用 于样品成分分离、脱盐或缓冲液置换和分子量或分子 常数估算。

硅材料的分子量排阻层析柱应用于分离pH 2–8 的多肽、蛋 白和核酸。分析柱有不锈钢（Bio–Sil）和生物兼容的PEEK塑料（Bio– Silect）两种。Bio–Sil 和Bio–Silect SEC 柱填装了5μm 亲水结合相硅，蛋白 载量0.01–1.5 mg。为了分离洗脱峰较接近的蛋白，获得更高的分辨率，可 串联使用2 个300 mm SEC 柱、工作压>1000 psi 的系列层析系统。

该层析柱确保在70°C 下的热稳定性以及化学稳定性。介质在甲醇、 乙醇、氰化甲烷、DMSO 和THF 等有机溶剂中稳定。

更多信息，请索取资料# 1737。